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僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。

牛羊口蹄疫病毒O型抗體（FMDV）檢測試劑盒（ELISA）

說明書

貨號：INS0020008

    使用前，請務必仔細閱讀說明書，如有不清楚的，請撥打24h技術(shù)支持專線：0714-6338558或18171667592/18108699172，咨詢清楚再進行實驗。

黃石市艾恩斯生物科技有限公司

電話：0714-6338558

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：牛羊口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus O（ELISA）

【包裝規(guī)格】

48T/盒，96T/盒

【預期用途】

本試劑用于檢測牛羊血清中口蹄疫病毒O型抗體，可用于免疫效果評價、輔助診斷等

【檢驗原理】

  本試劑盒系由預包被牛羊口蹄疫病毒O型抗體抗原的酶標板（固相抗原，貨號：INS0020008C）、抗體工作液（貨號：INS0020008J）、酶標記物（酶標抗體，貨號：INS0020008E）及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯(lián)免疫法原理檢測禽血清或血漿中牛羊口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有牛羊口蹄疫病毒O型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有牛羊口蹄疫病毒O型抗體。

【主要組成成分】

主要成分

陰陽性對照已經(jīng)通過測試，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應當遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

  1、酶標儀

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4、洗瓶或者自動洗板機

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。

  2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為28天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復凍融。

2、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融。

3、蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。

4、用工作洗滌液將待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋（如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗方法】

試劑準備

1、使用前，所有的組分都要至少復溫2h，確保充分復溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。

3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，陰性/陽性對照和樣品，建議做復孔。

2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設置陰陽性對照孔、樣本孔，陰陽性對照孔各加對照品50μL，樣本孔加樣本50μL。

5、每孔加抗體工作液50μl，混勻，置37℃反應30分鐘。

6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

7、所有孔加入辣根過氧化物酶標記物100μL。

8、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。

9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15min。

   10、每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】

實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥0.98，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×55%。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1.PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100；

2.PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。

【檢驗方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當稀釋后，再重新測定。

6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。

7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。

2、陰性結(jié)果

陰性對照的OD值高于0.98。

3、陽性結(jié)果

陽性對照的OD值低于陰性對照的OD值的55%。

4、特異性

本試劑盒識別天然和重組牛羊口蹄疫病毒O型抗體，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。

5、穩(wěn)定性

    2℃-8℃保存，有效期6個月。

【注意事項】

生物安全

1、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時，避免起泡。

2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6、實驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物。

【基本信息】

  企業(yè)名稱：黃石市艾恩斯生物科技有限公司

  生產(chǎn)地址：湖北省黃石市黃石港區(qū)磁湖路41號

  固定電話：0714-6338558

  郵    箱：postmaster@inselisa.com